Pewarnaan Gram pada Bakteri
Halo, gaes.. pada postingan kali ini saya akan membahas
mengenai pewarnaan Gram pada bakteri. Gimana sih caranya? Bakteri kok
bisa diwarnai ya? Oke, langsung aja ya..
Oh yaa.. kalau kalian males baca.. boleh nonton langsung aja di link: https://www.youtube.com/channel/UCvqNF47YOW-NPoDmHHQbbKw
Oh yaa.. kalau kalian males baca.. boleh nonton langsung aja di link: https://www.youtube.com/channel/UCvqNF47YOW-NPoDmHHQbbKw
Apa itu pewarnaan Gram?
Pewarnaan
Gram adalah teknik pewarnaan yang digunakan untuk membedakan dua kelompok besar
bakteri berdasarkan konstituen penyusun dari dinding sel bakteri, yang mana
dengan pewarnaan Gram dapat membedakan antara kelompok Gram positif dan Gram
negatif. Warna yang digunakan dalam pewarnaan Gram adalah merah atau ungu/violet.
Pada bakteri Gram positif terdapat lapisan peptidoglikan yang tebal pada
dinding selnya yang akan menyerap warna violet dari kristal violet, sehingga
bakteri Gram positif mempertahankan kristal violet tersebut. Lain halnya dengan
bakteri Gram negatif yang memiliki dinding peptidoglikan yang lebih tipis, sehingga
tidak dapat mempertahankan violet kristal selama proses penguraian warna tetapi
akan menyerap pewarna lainnya, yaitu warna merah dari safranin.
Pewarnaan
Gram melibatkan tiga proses, yaitu pewarnaan dengan pewarna yang larut dalam
air, seperti kristal violet, dekolorisasi, dan pewarnaan ulang balik (counterstaining),
biasanya dengan safranin. Perbedaan dalam ketebalan lapisan peptidoglikan dalam
membran sel antara bakteri Gram positif dan Gram negatif, menyebabkan bakteri
Gram positif akan mempertahankan warna ungu dari kristal violet selama proses
dekolorisasi, sedangkan bakteri Gram negatif kehilangan warna ungu dari kristal
violet dan sebaliknya Gram negatif akan menyerap warna merah dari safranin
dalam proses pewarnaan akhir.
Sampel
yang mengandung bakteri setelah diwarnai dengan pewarna kristal violet, selanjutnya
ditambahkan larutan Gram yodium (yodium dan kalium iodida) agar terbentuk kompleks
antara kristal violet dan yodium. Kompleks tersebut merupakan molekul yang
lebih besar daripada pewarnaan kristal violet aslinya dan yodium bersifat tidak
larut dalam air, sehingga mampu mempertahankan warna kristal violet dalam sel
bakteri.
Dekolorisasi
seperti penggunaan etil alkohol atau aseton ditambahkan ke sampel, hal tersebut
berfungsu untuk mendehidrasi lapisan peptidoglikan, menyusut dan
mengencangkannya. Kompleks kristal violet-yodium besar tidak mampu menembus
lapisan peptidoglikan yang diperketat tersebut, dan akhirnya terperangkap dalam
sel bakteri Gram positif. Sebaliknya, membran luar bakteri Gram negatif
terdegradasi dan lapisan peptidoglikan yang lebih tipis dari sel negatif Gram
tidak dapat mempertahankan kompleks kristal violet-yodium, sehingga menyebabkan
warnanya ungu dari kristal violet hilang.
Counterstaining, seperti penggunaan safranin yang larut dalam air yang
lemah, ditambahkan ke sampel tersebut, hingga terwarnai merah. Safranin yang lebih
ringan daripada violet kristal, itu tidak mengganggu warna ungu dalam sel Gram
positif tetapi, sel Gram negatif Gram yang tidak berwarna akibat dekolorisasi
akan berwarna merah.
Prinsip
Pewarnaan Gram pada Bakteri
Bakteri
Gram Positif akan menyerap warna ungu dari kristal violet setelah proses dekolorisasi,
sedangkan bakteri Gram negatif akan kehilangan warna ungu saat dekolorisasi dan
akan menyerap warna merah dari safranin.
Alat dan Bahan
1. Kristal violet
2. Larutan yodium
3. Etanol
4. Safranin
5. Aquades dalam botol semprot
6. Object glass
7. Mikroskop
8. Bunsen
7. Mikroskop
8. Bunsen
Prosedur
Pewarnaan pada Bakteri Gram
- Setetes atau 1 ose sampel yang mengandung bakteri dibuat preparat pada object glass, lalu diratakan.
- Sampel tersebut difiksai (dipanaskan diatas api Bunsen dengan hati-hati dengan cara melewatkan preparat diatas api Bunsen 3 kali.
- Kristal violet ditambahkan diatas preparat, lalu diinkubasi selama 1 menit.
- Preparat dibilas dengan aliran aquades selama 5 detik secara perlahan untuk menghilangkan kristal violet yang tidak terikat dengan sel bakteri.
- Larutan Gram yodium ditambahkan diatas preparat dan diinkubasi selama 1 menit.
- Preparat dibilas dengan etanol selama ~ 3 detik dan dengan segera dibilas dengan aliran aquades secara perlahan. Alkohol akan menghilangkan warna ungu pada sampel jika itu adalah Gram negatif, tetapi jika alkohol tetap pada preparat terlalu lama, itu juga dapat menghilangkan pewarna kristal violet pada sel Gram positif.
- Safranin ditambahkan diatas preparat lalu diinkubasi selama 1 menit.
- Cuci dengan aliran aquades secara perlalahan selama maksimal 5 detik. Jika bakteri tersebut adalah Gram positif, ia akan mempertahankan pewarna kristal violet dan tidak menyerap pewarna safranin. Jika bakteri tersebut adalah Gram negatif, ia akan kehilangan pewarna kristal violet dan menyerap pewarna safranin.
- Preparat diamati menggunakan mikroskop pada perbesaran 400X sampai 1000X (menggunakan minyak imersi).
Interpretasi Hasil
Hasil Pewarnaan Gram pada Bakteri
Sel berwarna merah = (+)
Bakteri Gram Positif
Sel berwarna ungu = (+) Bakteri
Gram Negatif